「Cre/loxp」应用策略?

「Cre/loxp」应用策略?

应用Cre/LoxP重组系统较为常见的形式是两种转基因动物的杂交。一般的策略为:

(1) 利用原核注射的方法获得转基因“Cre小鼠”。一般利用特定启动子控制此小鼠的Cre重组酶的表达;

(2) 通过置换型载体的同源重组,在胚胎干细胞中向靶位点引入选择标记基因,并在其两侧引入两个loxP位点,要求两条同源染色体都带有loxP位点,且不能干扰靶基因的转录。将此胚胎干细胞注入假孕母鼠中,发育成“floxed小鼠”;

(3)“Cre小鼠”与“floxed小鼠”交配,产生的后代体内,Cre重组酶会与loxP位点发生作用,导致基因重组。

虽然此法具备了Cre/LoxP重组系统的高效、特异的重组,但存在许多不足:

目前,由于病毒依赖的基因重组能否克服转基因动物的诸多不足,从而成为越来越多科研工作者的新选择。病毒依赖的Cre/LoxP重组系统的策略为:

(1) 通过转基因动物办法获得一只“Cre小鼠”或“floxed小鼠”;

(2) 病毒注射此“Cre小鼠”或“floxed小鼠”,引入loxP或Cre重组酶元件。

此方法优势明显:

维真为您提供Cre/LoxP重组系统的AAV载体构建和病毒包装服务

1. 依赖Cre重组酶诱导表达的FLEX-ON系统

结合组织特异性的启动子和不同的AAV血清型,维真提供的FLEX-ON系统能帮您获得更精准的组织特异性控制和时间控制。

在FLEX-ON系统中,目的基因反方向位于启动子下方,两侧分别连接两个“头对头”的loxP。Cre重组酶不存在时,目的基因不能表达;当Cre重组酶存在时,可以诱导目的基因的“翻转”,从而表达。

2. 依赖Cre重组酶反式剪接系统——轻松拥有“表达大基因的AAV”

较小的包装能力(小于5kb)使得AAV应用受到限制。维真为您提供依赖Cre的反式剪接系统,让您轻松拥有“表达大基因的AAV”。

多个重组AAV的共转染效率高达90%,维真将较大基因分为两部分构建于两个AAV载体上。通过ITR的重组、mRNA剪接和Cre/LoxP消除ITR的对转录的抑制作用,实现目的蛋白的表达。相比于单个载体维真提供的依赖Cre的反式剪接系统的表达效率约20%。