求问:T7启动子是如何被引入到crRNA序列上?

求问:T7启动子是如何被引入到crRNA序列上?

T7 RNA聚合酶,(T7 RNA Polymerase) 是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5'→3' RNA聚合酶。T7 RNA Polymerase以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板,NTP为底物,合成与启动子下游的单链DNA或 双链DNA模板链互补的RNA。

T7 RNA Polymerase可以识别修饰的NTP,例如生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的NTP,可以用于各种标记RNA的合成。同时对于T7启动子有高度的特异性。

T7 启动子(T7 promoter):

TAATACGACTCACTATAGGG

酶储存溶液:10 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,50% Glycerol

10X Transcription Buffer:

400 mM Tris-HCl

60 mM MgCl2

10 mM DTT

20 mM spermidine

失活或抑制:

70℃加热10分钟可使T7 RNA Polymerase失活。加入适量EDTA也可以使T7 RNA Polymerase失活。螯合剂、浓度大于150mM的钠、钾或铵盐可以显著抑制T7 RNA Polymerase的活性。

建议反应体系:

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